用恒温培养箱进行水中土壤菌群的测定

　　用恒温培养箱进行水中土壤菌群的测定
　　本方法适用于工业冷却水中土壤菌群的测定,也适用于原水、生活用水及其他水中土壤菌群的测定.基本方法是采用混合培养基,利用平皿计数技术,在恒温培养箱中培养72小时,测定循环冷却水中土壤菌群的总数。下面给大家介绍一下具体步骤。
　　1、测定步骤
　　1.1水样的采集
　　1.2用无菌采样瓶采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和瓶颈，防止这些部分受杂菌污染。瓶内要留下足够的空间，以备测定之前摇晃。
　　1.3若采集的水中有余氯，应于采样前在无菌操作下于无菌采样瓶中加人灭过菌的硫代硫酸钠，加人量为每升水样约0.1g。
　　1.4水样采集后应立即进行测定，如果2h内不能进行测定，应把水样放在冰箱中，于4℃~10℃保存，保存时间不宜超过24h。经冷冻保存后的水样需测定时，从冰箱中取出于30℃左右活化4h~5h，再进行测定。
　　1.5无菌箱(室)灭菌，把实验所用的无菌稀释水、无菌培养皿、无菌吸管等用品放人无菌箱(室)内，打开紫外线灯灭菌30min。
　　1.6水样的稀释和接种，关掉紫外线灯，打开荧光灯，将待测水样放人无菌箱(室)中，立即用75%的乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯。
　　以下对水样的稀释和接种条的操作应在无菌箱(室)内的火焰区进行。
　　1.7选择适宜的稀释度，应使后一个稀释度接种后培养皿中生长的菌落数小于300个，在空白稀释水样瓶上标上稀释度数。
　　1.8用10倍稀释法稀释水样，即用5mL无菌吸管吸取5mL水样注入到45mL空白稀释水中充分摇匀，此时稀释度为10-1.
　　1.9另取一支5mL无菌吸管吸取5mL10-1水样移人到第二个稀释水中，充分摇匀，此时稀释度为10~2，依次类推，直至需要的稀释度为止。
　　1.10将不同稀释度的水样分别接种到无菌培养皿中，每个稀释度重复接种3~5个皿，每皿接种1mL，接种时左手掌托住培养皿，大拇指和食指轻轻将培养皿提起，吸管与培养皿底成45°角相接。移开吸管时吸管不宜再碰到培养皿。接种时间不宜超过4s。每接种一个稀释度更换一支无菌吸管。另取一组培养皿不接水样，作为空白。同时操作。
　　1.11将灭过菌的培养基冷却至(45士1)℃，掀开培养皿盖，将培养基灌入培养皿内，每皿应灌15mL~20mL。灌皿时不要使培养基直接灌在水样上，灌皿后要将融化的培养基和皿中水样*混合， 小心勿使混合液溅到培养皿的边缘， 测定一个水样从接种到灌皿不得超过20min。
　　2、培养
　　待培养皿中培养基固化后，倒置平皿，在恒温培养箱中29℃培养72h。